一件代发单号不能用两次。这是快递行业的基本规则，每个快递单号都具有唯一性，只能对应一个特定的包裹。

快递单号的唯一性是由其功能和管理规范决定的。快递单号是包裹的唯一标识代码，用于记录和追踪包裹的运输信息。每个单号对应着特定的寄件人、收件人、物品信息等数据。如果单号被重复使用，将导致物流信息混乱，无法准确追踪包裹状态。快递公司都有严格的管理规定，禁止单号重复使用。这是为了保证物流信息的准确性和可追溯性，维护快递服务的质量。违反这一规定可能会受到处罚。从技术层面来看，快递单号通常会在系统中保留一定时间（如三个月）的物流信息，在此期间不会进行回收利用。只有在特殊情况下，如单号资源紧张时，才可能对过期单号进行回收再利用，但这种情况非常少见。对于电商平台如淘宝、拼多多等，重复使用单号更会被视为虚假交易行为，可能导致店铺处罚。无论是从技术实现、行业规范还是实际操作来看，一件代发的快递单号都不能重复使用。